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蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(WB)的常見問題分析
來源:測試GO 時(shí)間:2022-09-07 14:16:01 瀏覽:3714次

1蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)蛋白樣本為什么要進(jìn)行還原和變性?

答:為了使樣本被還原和變性,樣品緩沖液中會(huì)含有十二烷基硫酸鈉(SDS)β-巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)。SDS是一種變性劑,用來打破蛋白的高級結(jié)構(gòu),變成初級的氨基酸結(jié)構(gòu),同時(shí)以恒定的質(zhì)量比包被蛋白質(zhì),使其帶上負(fù)電荷。這一恒定的負(fù)電荷比是下一步凝膠電泳分離的關(guān)鍵。β-巰基乙醇和DTT都是還原劑,用來斷開蛋白自身的二硫鍵,進(jìn)一步使蛋白質(zhì)變成線性結(jié)構(gòu),此圖中簡單地展示了這一過程。順便提一下,有些抗體只能夠識別目標(biāo)蛋白的天然結(jié)構(gòu),在這種情況下,樣本不需要被還原和變性。所以還原和變性的步驟可以省略。但是,大多數(shù)蛋白質(zhì)印跡分析都需要在還原和變性的體系中進(jìn)行。

 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)圖片

2、為什么檢測重組蛋白時(shí)難以獲得條帶?

答:抗體檢測重組蛋白質(zhì)時(shí),存在難以克服的困難,有必要加以考慮。所以推薦確保樣品中表達(dá)的重組蛋白包含所用抗體的免疫原序列。同時(shí),如果重組蛋白帶有標(biāo)簽,標(biāo)簽可能阻止抗體接近表位。盡可能讓標(biāo)簽位于重組蛋白的CN末端,以降低這種情況發(fā)生的可能性(而不是位于蛋白質(zhì)的閱讀框中間)。

3、牛奶和 BSA 封閉有區(qū)別?

:抗體可能對封閉劑敏感,一般來講,BSA會(huì)產(chǎn)生更清晰的結(jié)果,因?yàn)?/span>BSA含有較少的蛋白,因而抗體較少與其發(fā)生交叉反應(yīng)。但并非總是如此,有些抗體在牛奶中的效果更好,因?yàn)榕D毯懈喾N類的封閉蛋白,能封閉更多不同類型的蛋白質(zhì)。


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全部 3小時(shí)前 四川
文字是人類用符號記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具?,F(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產(chǎn)生書面文字,很多小語種,有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類進(jìn)入有歷史記錄的文明社會(huì)。
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